Test-Ausrüstung des Chloromycetin-ELISA
Messgrundlage
Prinzip
Diese Testausrüstung basiert auf dem wettbewerbsfähigen Enzym Immunoassay für die Entdeckung des Chloromycetins in der Probe. Das Koppelungsantigen wird auf den mikro--gut Streifen vorgalvanisiert. Das Chloromycetin in der Probe und das Koppelungsantigen, das auf den mikro--gut Streifen vorgalvanisiert wird, konkurrieren für den Antichloromycetinantikörper. Nachdem der Zusatz des Enzymparonyms, das TMB-Substrat für Färbung hinzugefügt ist. Der optische Dichte (OD)-Wert der Probe hat eine negative Wechselbeziehung mit dem Chloromycetin in ihm. Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und die Chloromycetinkonzentration wird nachher erreicht.
Spezifikationen
Empfindlichkeit: 0.1ppb
Nachweisgrenze
Honig über 0.1ppb
Kreuzreaktionsrate
Chloromycetin 100%
Wiederfindungsrate < 0="">
Thiamphenicol < 0="">
Florfeniol
70±10%
Komponenten
1) Mikro--gut Streifen: 12 Streifen mit 8 entfernbaren Brunnen jeder
2) Standardlösung 6× (je 1 ml): 0 ppb, 0,05 ppb, 0,15 ppb, 0,45 ppb, ppb 1,35 ppb und 4,05
3) verbundene (12 ml) rote Kappe des Enzyms
4) starke blaue Kappe der Antikörperfunktionslösung (1 ml)
5) weiße Kappe der Lösung des Substrates A (7 ml)
6) Schwarzkappe der Lösung des Substrates B (7 ml)
7) stoppen Gelbkappe der Lösung (7 ml)
8) konzentrierte 20× waschende weiße Kappe des Puffers (40 ml)
9) konzentrierte 2× das Wieder auflösen der transparenten Kappe der Lösung (50 ml)
Materialien erfordert aber nicht bereitgestellt
1) Ausrüstungen: microplate Leser (450nm, 630nm), Drucker, Homogenisierer, Stickstofftrocknergerät, Turbulenz, Schüttel-Apparat, die Zentrifuge (3000g und oben), messend pipettiert, balanciert (eine gegenseitige Empfindlichkeit von 0,01 g), Brutkasten (4℃, 25℃), Wasserbad, Timer;
2) Micropipettors: Einkanal-µL 20-200 µL, 100-1000 und Achtkanal 30~300 µl;
3) Reagenzien (AR): HCl, NaOH, Ethylacetat, N-Hexan.
Beispielvorbehandlung
Anweisungen
Mit die folgenden Punkte müssen vor der Vorbehandlung irgendeiner Art Probe beschäftigt werden:
1.Only die Wegwerfspitzen kann für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen geändert werden, wenn sie für das Absorbieren von verschiedenen Reagenzien verwendet werden;
2. Vor dem Experiment muss jede experimentelle Ausrüstung sauber sein und sollte gegebenenfalls wieder-gesäubert werden, um die Verschmutzung zu vermeiden, die die Versuchsergebnisse behindert.
Lösungsvorbereitung vor Beispielvorbehandlung:
Honig
1) wiegen Honigprobe 2± 0,05 g in Plastikrohr der zentrifuge 50ml;
2) addieren 2ml 0.1M NaOH, Erschütterung stark für 1min (oder Gebrauchsturbulenz für 30s) um sich aufzulösen;
3) fügen Ethylacetat 4ml, Erschütterung stark für 5min, (oder Turbulenz für 1min) hinzu und lassen Probe und Ethylacetat vollständig in Verbindung treten;
4) Zentrifuge an über 3000 g bei Zimmertemperatur für 5min;
5) nehmen Supernatant 2ml in Glasrohr 10ml (Anmerkung: nehmen Sie nicht Untenschichtwasserphase), durchbrennen, um im Wasserbad 50-60℃ durch Stickstofftrocknergerät zu trocknen;
6) addieren 0.5ml, das stark Lösung, Erschütterung für 2min wieder auflöst (oder Gebrauchsturbulenz für 1min);
7) nehmen Flüssigkeit des Grundanstrichs 50ul für den Test.
Falte der Verdünnung der Probe: 0,5
ELISA-Verfahren
Anweisungen
1) holen alle Reagenzien und mikro--gut Streifen zur Raumtemperatur (℃ 20-25) vor Gebrauch;
2) bringen alle Reagenzien zu ℃ 2-8 sofort nach Gebrauch zurück;
3) hängt die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse in hohem Grade von der Übereinstimmung der Plattenreinigung ab. Die korrekte Operation der Plattenreinigung ist der springende Punkt in ELISA die Verfahren;
4) für die Ausbrütung bei den konstanten Temperaturen, müssen alle Proben und Reagenzien Belichtung vermeiden, und jedes microplate sollte durch die Abdeckungsmembran versiegelt werden.
Operationsverfahren
1. holen Sie Testausrüstung zur Raumtemperatur (℃ 20-25) für mindestens Minute 30, merken, dass jedes Reagens gerüttelt werden muss, um gleichmäßig vor Gebrauch zu mischen, setzen die erforderlichen mikro--gut Streifen in Plattenrahmen. Versiegelte das unbenutzte microplate, Speicher bei ℃ 2-8 wieder, friert kein.
2. Nummerierung: nummerieren Sie die Mikrobrunnen entsprechend Proben und Standardlösung; jede Probe und Standardlösung sollten in doppelter Ausführung durchgeführt werden, notieren ihre Positionen.
3. fügen Sie µL 50 der Probe oder der Standardlösung in unterschiedliche doppelte Brunnen hinzu; fügen Sie µL dann 50 der Antikörperfunktionslösung in jedes gut, Mischung leicht hinzu, indem Sie manuell die Platte rütteln. Versiegeln Sie das microplate mit der Abdeckungsmembran, und brüten Sie bei ℃ 4 für 60min in der Dunkelheit aus.
4. gießen Sie Flüssigkeit aus microwell heraus, flattern, um auf saugfähigem Papier zu trocknen, 250 µL/well des waschenden Puffers Wäsche microplate für 15-30 s hinzuzufügen, dann, herauszunehmen und die Klappe, zum mit saugfähigem Papier zu trocknen, wiederholen 3-4mal. (Wenn schnitt es die Blasen gibt, nachdem man geflattert hat, sie mit den sauberen Spitzen).
5. addieren Sie Paronym des Enzyms 100ul, Mischung leicht, indem Sie manuell die Platte rütteln (nach dem Waschen der Platte, setzen Sie sie nicht beiseite für A). Versiegeln Sie das microplate mit der Abdeckungsmembran, und brüten Sie bei ℃ 25 für 20min in der Dunkelheit aus. Waschen als Schritt 4.
6. Färbung: fügen Sie Mischung 100ul der Lösung des Substrates A und der Lösung des Substrates B in jedes Brunnen hinzu (Anmerkung: mischen Sie Lösung des Substrates A und Lösung des Substrates B am 1:1, benutzen die Mischung in 10min, benutzen nicht Metall, um das ungültige Substrat zu enthalten oder zu rühren, zu vermeiden). Mischen Sie leicht, indem Sie manuell die Platte rütteln, versiegeln Sie, das microplate mit der Abdeckungsmembran dann brüten Sie bei ℃ 25 für Minute 15 an der Dunkelheit für Färbung aus.
7. Bestimmung: fügen Sie µL 50 der Endlösung in jedes gut hinzu. Mischen Sie leicht, indem Sie manuell die Platte rütteln. Stoppen Sie erfolgreich wenn Substratfarbe von Blauem zum Gelb. Empfehlen Sie sich, den Od-Wert an der Doppel-wellenlänge zu lesen 450/630 Nanometer innerhalb 5 Minuten.
Ergebnisurteil
Es gibt zwei Methoden, zum der Ergebnisse zu beurteilen: das erste man ist das raue Urteil, während das zweite die quantitative Bestimmung ist. Merken Sie, dass der Od-Wert der Probe eine negative Wechselbeziehung mit der Metronidazole-Konzentration hat.
1. qualitative Bestimmung
Der Konzentrationsbereich (ng/mL) von Metronidazole kann vom Vergleichen des durchschnittlichen Od-Wertes der Probe mit dem der Standardlösung erhalten werden. , dass der Od-Wert des Beispiel- Ⅰ 0,3, ist- und das des Beispiel-Ⅱ ist- 1,0, den Od-Wert von Standardlösungen anzunehmen ist: 2,243 für 0 ppb, 1,816 für 0,1 ppb, 1,415 für 0,3 ppb, 0,74 für 0,9 ppb, 0,313 für ppb 2,7, 0,155 für ppb 8,1, dementsprechend der Konzentrationsbereich des Beispiel- Ⅰ ist- ppb 2,7 bis 8,1, und das des Beispiel-Ⅱ ist- 0,1 zu 0.9ppb.
2. quantitative Bestimmung
Die Mittelwert der Absorptionswerte wird für den durchschnittlichen Od-Wert (b) der Probe und der Standardlösung erhalten, die durch den Od-Wert (B0) geteilt werden der ersten Standardlösung (0 Standard) und nachher bis zum 100% d.h., die multipliziert sind
Prozentsatz von Absorptionswert = von B ×100%
B0
B-thedurchschnitt Od-Wert der Probe oder der Standardlösung
B0-the berechnen Od-Wertes der 0 ng-/mLstandardlösung
Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösung und den semilogarithm Werten der Chloromycetinstandardlösung (ng/mL) als y und X-Achse, beziehungsweise. Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Probe von der Standardkurve, indem Sie seinen Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve enthalten. Der resultierende Wert wird nachher mit der entsprechenden Verdünnungsfalte multipliziert und schließlich erreicht die Chloromycetinkonzentration in der Probe.
Unter Verwendung analysierend ist die Berufssoftware dieser Ausrüstung für die genaue und schnelle Analyse einer großen Menge Proben bequemer.
Vorkehrungen
1. Die Raumtemperatur unterhalb ℃ 25 oder die Temperatur der Reagenzien und der Proben, die nicht zur Raumtemperatur (℃ 20-25) zurückgegangen werden führen zu einen niedrigeren Standard Od-Wert.
2. wird Trockenheit des microplate im Waschvorgang von den Situationen einschließlich die nichtlinearen Standardkurven und die unerwünschte Reproduzierbarkeit begleitet; Fahren Sie so zum nächsten Schritt sofort nach dem Waschen fort.
3. mischen Sie gleichmäßig, andernfalls gibt es die unerwünschte Reproduzierbarkeit.
4. Die Endlösung ist- die 2-m-Schwefelsäurelösung, vermeiden Kontakt mit der Haut.
5. Benutzen Sie nicht die Ausrüstung, die sein Verfallsdatum übersteigt. Der Gebrauch der verdünnten oder verfälschten Reagenzien von den Ausrüstungen führt zu die Änderungen in der Empfindlichkeit und in den Entdeckungsod-Werten. Tauschen Sie nicht die Reagenzien von den Ausrüstungen von verschiedenen Losen aus, um zu verwenden.
6. setzen Sie das unbenutzte microplate in eine Selbst-dichtungstasche, um sie wieder zu versiegeln. Die Standardlösung und die farblose Farbe, die ehemalig ist, ist lichtempfindlich, und folglich können sie nicht dem Licht direkt ausgesetzt werden.
7. werfen Sie die Färbungslösung mit jeder möglicher Farbe weg, die die Degeneration dieser Lösung anzeigt. Der Entdeckungswert der Standardlösung 1 (0 ppb) von weniger als 0,5 zeigt seine Degeneration an.
9. Lagerung und Verfallsdatum
Lagerung: Speicher bei dem ℃ 2-8, nicht eingefroren.
Verfallsdatum: 12 Monate; Herstellungsdatum ist auf Kasten.
